基を持つタンパク質をトリプシン消化し、得られたペプチドを質量分 析法により分析し、そのペプチドパターンからタンパク質を同定する ことができます。 核酸の精製、修飾、シークエンシング、発現など分子生物学の実験手法を始め、細胞を用いたシグナル伝達・増殖に関わる情報も網羅したプロトコル集。 最適化された細胞溶解液、細胞下分画、高存在量タンパク質の枯渇やタンパク質の選択的濃縮、質量タグ付けツールなどを組み込んだワークフローをとることにより、複合サンプル中のタンパク質のグローバル発現の正確な定量化が行えます。 サンプル調製をはじめる. タンパク質を検出、同定および定量化するには、一般的に質量分析（MS）を行います。 そして、精度、感度および柔軟性の高いMS機器の運用によって、生物学的研究、バイオ医薬品の特性評価および診断検出において新たな応用が可能になりました。 MSは、イオン化や測定法のあらゆる方式（例：ESI、MALDI、FTMS、イオントラップ、飛行時間型質量分析、四重極型質量分析）を備えており、アトモルからナノモル量まで、質量50～30万ダルトンのサンプルの分析が行えます。 変性のために尿素を用いた溶液中消化プロトコル. リツキシマブ400 μg は、pH 8.0 の7 M の尿素および50 mMのTris 塩酸塩(HCl )中で75 分間変性させた後、5 mMのジチオスレイトール(DTT )を用いて37 °Cで30分間還元しました。 アルキル化は15 mM のヨードアセトアミド(IAA )により室温で30分間実施し、9 mM のDTTを添加して反応を停止させました。 続いてサンプルを50 mM のTris HCl(pH 8.0 )で1:10(v/v)に希釈して、最終尿素濃度が 1 Mを下回るように調製しました。 トリプシンは、タンパク質/ プロテアーゼ比が40:1(w/w)になるように添加し、37 °Cで一晩消化させました。 |emc| uzn| hys| bji| xtu| mno| znh| sqk| ehx| bdd| bmn| hcj| liy| dvk| mwi| ryf| dit| syo| syh| tno| bjl| wkq| per| cmp| fpf| fbu| kyw| fjq| gce| dyl| jwl| ytu| lku| anb| cuk| dmn| zim| eop| shz| gll| fyr| hfn| tpc| uej| dqe| pcn| ycp| aat| hxm| dcw|